Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇÃO DE DIFERENTES CONDIÇÕES PRÉ-ANALÍTICAS PARA O DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE RESISTÊNCIAS BACTERIANAS

Fundamentação/ Introdução

A produção de carbapenemases do tipo Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), a qual é mediada por plasmídeos, representa uma ameaça global à saúde humana. Variáveis como a idade do isolado bacteriano, a forma de acondicionamento das amostras e a qualidade do material genético podem ser determinantes para o diagnóstico dessa resistência bacteriana.

Objetivos

Avaliar o impacto de condições como o tempo para o processamento, a temperatura de acondicionamento e do método de extração de DNA de isolados bacterianos para o diagnóstico molecular do gene de resistência blaKPC-2.

Delineamento e Métodos

Estudo experimental desenvolvido no Laboratório Escola de Análises Clínicas da Universidade Franciscana – Santa Maria/RS. O experimento foi realizado a partir do crescimento de 24 h de um isolado bacteriano de referência positiva para KPC em 12 placas com o meio seletivo ágar MacConkey. Após o crescimento, metade dos isolados foi armazenada em temperatura ambiente e outra acondicionada em temperatura refrigerada (2 ºC - 8 ºC). O DNA bacteriano foi obtido de uma solução de escala 2 McFarland preparada a partir dos isolados a qual foi submetida às extrações por fervura e por um kit comercial, que se utiliza microesferas magnéticas, nos dias 1, 2, 3, 5 e 8 após a semeadura inicial. Os ácidos nucleicos foram submetidos a reação em cadeia da polimerase para amplificação do gene blaKPC-2 cuja detecção foi documentada em gel de agarose a 1 %. A detecção de um fragmento de 893 pb no controle positivo e nas amostras foi o critério utilizado para validação do resultado positivo.

Resultados

Indiferentemente ao método de extração nos dias 1 e 2 foram detectadas respectivamente 91,66% e 75,0 % de resultados positivos de amostras acondicionadas refrigeradas, o mesmo se observou em amostras mantidas em temperatura ambiente as quais apresentaram taxas de detecção de 100% e de 91,66% nos dois primeiros dias de crescimento de isolados. A partir do terceiro dia de idade do isolado bacteriano ocorre uma redução significativa das taxas de detecção de KPC em ambas as formas de conservação dos isolados. A comparação dos métodos de extração mostrou a superioridade do kit comercial frente a extração por fervura tanto para amostras armazenadas em condição refrigerada (p = 0.0007) ou em temperatura ambiente (p = 0.0001).

Conclusões/ Considerações Finais

A observância de até 48 h transcorridas do isolamento bacteriano é fundamental para o resultado fidedigno da detecção molecular de KPC.

Palavras-Chave

Controle de infecção; KPC-2 beta-lactamase; Reação em cadeia da polimerase.