Dados do Trabalho

Título

ANALISE METABOLOMICA POR RMN DE MACROFAGOS MURINOS DA LINHAGEM RAW-BLUE ESTIMULADOS POR LPS

Palavras-Chave

Inflamação. RAW-Blue. RMN. Metabolômica. LPS. Itaconato. DMEM.

Fundamentação/Introdução

A inflamação é uma resposta do sistema imunológico a infecções e lesões que, quando persistente, pode resultar em doenças como a aterosclerose e a artrite reumatoide. Durante o processo inflamatório, alterações metabólicas em células do sistema imunológico, como macrófagos, influenciam, não apenas a atividade e a função das células ou de um tecido, mas todo o desfecho da resposta imunológica e da homeostase do organismo.

Objetivos

O objetivo do presente estudo foi realizar uma análise metabolômica inédita da linhagem celular de macrófagos murinos RAW-Blue estimulada para a resposta inflamatória por lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano in vitro, em comparação a um grupo controle, não tratado, a fim de identificar biomarcadores inflamatórios celulares e secretados e contribuir para estudos posteriores na área do imunometabolismo celular.

Delineamento e Métodos

Neste estudo experimental, a resposta inflamatória estimulada por 100 ng/ml de LPS foi confirmada por ensaios com reagente de Griess e QUANTI-Blue. Foram analisadas as frações hidrofílicas e hidrofóbicas das células RAW-Blue, além do sobrenadante e do meio de cultivo celular Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), por meio de técnicas de espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) 1D e 2D, homonucleares e heteronucleares.

Resultados

No total, nos grupos tratado e controle, foram identificados 42 metabólitos no sobrenadante do cultivo celular, 60 metabólitos nas frações celulares hidrofílicas e 50 metabólitos nas frações celulares hidrofóbicas. Na comparação entre as frações celulares hidrofílicas tratadas com LPS e o grupo controle foi possível identificar uma concentração maior do biomarcador pró-inflamatório itaconato no grupo sob estímulo por LPS. Não foi possível identificar diferenças significativas entre os grupos nas frações celulares hidrofóbicas e no sobrenadante do cultivo celular. A análise comparativa entre os compostos presentes no meio de cultivo celular DMEM isolado e o sobrenadante das células RAW-Blue tratadas e não tratadas com LPS foi coerente com informações do fabricante do meio de cultivo e o esperado para o metabolismo das células.

Conclusões/Considerações finais

O aumento da concentração intracelular do biomarcador pró-inflamatório itaconato, derivado do ácido itacônico, nas células tratadas com LPS confirma o estímulo inflamatório. Os resultados estão de acordo com o que foi descrito em estudos metabolômicos semelhantes realizados com outras linhagens celulares de macrófagos murinos.